f引物和r引物的區別

F：Forward primer 上游引物R：Reverse primer 下游引物。

正向引物，反向引物。

引物自身及引物之間不應存在互補序列。連續互補的鹼基應該要少於4 個。引物應使其G值不要太高，G值越大，則雙鏈越穩定。

引物長度和GC 含量要適中。引物長度大概為18~28 bp，但不應大於38 bp，引物過短會影響到擴增的特異性，太長的話其延伸溫度將會大於74 ℃，不利Taq 酶的催化反應。若擴增產物為4~5 kb，引物最好不要少於24bp。