南京長江大橋全天24小時禁止非本市籍外地號牌機動車、非機動車通行。外地號牌機動車可根據相關通行政策由長江二橋、揚子江隧道、長江隧道等其他過江通道繞行外地號牌非機動車可透過輪渡通行。
全天禁止大型客車通行(公交車、本地持通行證通勤班車除外)。危化品運輸車輛、非本市主城號牌摩托車全天禁止通行。
外地號牌19座(含)以下客車也可由揚子江隧道通行。
除夜間23:00至次日晨6:00，允許本市籍中型及以下封閉、廂式貨車通行外，禁止貨車通行。爲保障涉及民生的確需通行大橋的貨物運輸，允許本地中型及以下貨車辦理通行證後(避開早晚高峯)通行(專項作業車、掛車參照貨車管理) 。
